پایان نامه مهندسی کشاورزی : شناسایی و تعیین نژادهای ویروس وای سیب زمینی (PVY) بروشهای مولکولی در استان گلستان

دانلود پایان نامه

عنوان پایان نامه :

 شناسایی و تعیین نژادهای ویروس وای سیب زمینی (PVY) بروشهای مولکولی در استان گلستان

یک صفحه از متن پایان نامه فقط برای نمونه :

 

 

 

2-1-1-8-مقایسه دو روش رایج شناسایی PVY

تاکنون روشهای مولکولی زیادی به منظور تفکیک جدایه­های PVYN از PVYNTN ابداع شده است. بعضی از این روش­ها براساس تفاوت­های توالی نوکلئوتیدی در انتهای ́5 ژنوم و برخی در انتهای ́3 ژنوم می باشند که در این روش­ها وقایع نوترکیبی در پروتئین پوششی بررسی و تعیین می گردد (بون هام و همکاران، a2002; بون هام و همکاران، b2002). و برخی دیگر از روش­ها براساس تنوع در کل ژنوم می باشد (گلایس و همکاران، 1998). مشخص شده است که همه جدایه­های PVYNTN شناخته شده دارای یک گوانین (G) در موقعیت 8611 می باشند، در حالی که سایر جدایه­ها (PVYC, PVYN, PVYO) یک آدنین (A) در همین موقعیت دارند (موراوک و همکاران، 2003). RT-PCR به دو روش یک مرحله­ای[1] و  دو مرحله­ای[2] انجام می گیرد. در روش یک مرحله­ای هر دو مرحله RT و PCR داخل یک لوله اپندورف PCR انجام گرفته و بین مرحله RT و PCR وقفه­ای وجود ندارد. ولی در حالت دو مرحله­ای که به دو صورت تک لوله و دو لوله انجام می گیرد، cDNA سنتز شده در مرحله RT به عنوان قالب وارد مرحله PCR می گردد. مزیت یک مرحله­ای به دو مرحله­ای این است که از ایجاد آلودگی احتمالی در حین انتقال از لوله RT به لوله PCR جلوگیری می گردد و همینطور حساسیت این روش بسیار بیشتر از Two-step بوده و مراحل پیپت کردن کمتری دارد و به طور معنی داری زمان مورد نیاز آزمایش و خطاهای حاصل از پیپت کردن را کاهش می دهد. این روش به علت انجام واکنش RT در دمای بالا مشکلات حاصل از تشکیل ساختمان های ثانویه RNA را حذف می کند، علاوه بر این تمام محصول cDNA به عنوان قالب در واکنش PCR استفاده می شود (چاندلیر و همکاران، 2001). از محاسن روش دو مرحله­ای نیز می توان به موارد زیر اشاره کرد: در این روش cDNA حاصل از واکنش RT در چند واکنش مختلف PCR مورد استفاده قرار می گیرد. با استفاده از آنزیم ترنس کریپتاز معکوس مناسب و DNA پلیمراز مقاوم به حرارت می توان توالی­های RNA را تا 14Kb نیز تکثیر نمود. روش RT-PCR را می توان به صورت duplex-RT-PCR به طور همزمان برای شناسایی دو ویروس و یا به صورت multiplex-RT-PCR برای شناسایی چند ویروس به کار برد. به عنوان مثال روش duplex برای شناسایی PVY و PLRV بکار گرفته شده است (سینگ و همکاران، 2000) و تکنیک multiplex برای شناسایی ویروس های PLRV، PVA، PVS، PVX و ویروئید دوکی شدن غده سیب زمینی (PSTVd) استفاده گردیده است. این روشها سبب صرفه جویی در وقت و میزان مواد مصرفی می گردد و از این رو مقرون به صرفه تر از تشخیص یک ویروس به ازای یک آزمون RT-PCR می باشد (نی و سینگ، 2001).

  طراحی و پیاده‌سازی یک زبان خاص دامنه برای آزمون نرم‌افزار-پایان نامه ارشد مهندسی فناوری اطلاعات

[1] One-step

[2] Two-step

دانلود  رایگان فایل دموی این پایان نامه(فقط حاوی ده صفحه از صفحات پایان نامه با فرمت ورد):

پایان نامه شناسایی و تعیین نژادهای ویروس وای سیب زمینی (PVY) بروشهای مولکولی در استان گلستان

دانلود  رایگان فایل دموی این پایان نامه(فقط حاوی ده صفحه از صفحات پایان نامه با فرمت pdf):

پایان نامه شناسایی و تعیین نژادهای ویروس وای سیب زمینی (PVY) بروشهای مولکولی در استان گلستان

برای دیدن جزئیات بیشتر ، خرید و دانلود آنی فایل متن کامل با فرمت ورد می توانید به لینک زیر مراجعه نمایید:

 دانلود از لینک زیر

 لینک متن کامل پایان نامه رشته مهندسی کشاورزی با عنوان شناسایی و تعیین نژادهای ویروس وای سیب زمینی (PVY) بروشهای مولکولی در استان گلستان